Иммуноблотинг при гепатите с

Подтверждающий тест на антитела к вирусу гепатита С (иммуноблот)

Описание

Подтверждающий тест на антитела к вирусу гепатита С (иммуноблот) — подтверждение положительных результатов скрининговых тестов на наличие антител к вирусу гепатита С.

Гепатит С — наиболее тяжёлая форма вирусного заболевания, которое поражает клетки печени, а также некоторые клетки крови (нейтрофилы, моноциты, В-лимфоциты).

Клиническая картина при гепатите С
Основные клинические проявления гепатита С очень неспецифичны: слабость, утомляемость, тошнота, отсутствие аппетита, потеря веса; при циррозе печени может появиться желтуха. Как правило, гепатит С протекает бессимптомно и в большинстве случаев диагностируется случайно. Гепатит C может вызвать как острую, так и хроническую инфекцию гепатита, которая влечет серьёзное пожизненное заболевание. Особо тяжёлый исход хронического гепатита С — цирроз печени и гепато-целлюлярная карцинома.

В норме антитела к вирусу гепатита С в крови отсутствуют.

Подтверждающий тест позволяет выполнять раздельную оценку наличия специфических IgG антител к различным антигенам вируса гепатита С (структурным нуклеокапсидным: Cor-1 и Cor-2 и неструктурным: хеликаза, NS3, NS4, NS5). Используется в качестве подтверждающего исследования для уточнения неясных результатов скрининговых ИФА тестов, направленных на суммарную оценку наличия антител к вирусу гепатита С.

Подтвердить результаты определения антител скрининговых ИФА-тестов помогает высокоспецифичное развёрнутое исследование антител методом иммуноблота, которое позволяет не только выявить, но также и идентифицировать антитела, направленные против определённых структурных и неструктурных компонентов вируса гепатита С, имеющих разную значимость.

Как и ИФА-тесты, этот метод информативен, в среднем, начиная с 3–4 недели инфекции — период появления в крови специфических антител.

Показания
Подтверждение положительных или сомнительных результатов, полученных при скрининговом исследовании антител к вирусу гепатита С.

Подготовка
Кровь рекомендуется сдавать утром, в период с 8 до 12 часов. Взятие крови производится натощак, спустя 4–6 часов голодания. Допускается употребление воды без газа и сахара. Накануне сдачи исследования следует избегать пищевых перегрузок.

Интерпретация результатов
Способ представления результата: на бланке результата отражен результат выявления антител к используемым антигенам, раздельно для Cor-1 и Cor-2, хеликазы, NS3, NS4, NS5 (отрицательный/сомнительный/положительный). Выдаётся общее заключение, сделанное на основании комплексной оценки результатов.

Отрицательный результат иммуноблота: человек не был инфицирован вирусом гепатита С (результат скрининговых ИФА тестов — ложноположительный).

Положительный результат иммуноблота: была инфекция вирусом гепатита С.

Сомнительный результат: возможно, была инфекция вирусом гепатита С.

Источник

Анализ на гепатит С методом иммуноблота: что значит серая зона и как расшифровать результат

EUROBLOTMASTER e1520336730789

Иммуноблот на гепатит С – высокоспецифичный развернутый тест, который позволяет подтвердить или опровергнуть результаты предварительных иммуноферментных анализов. ИФА определяет наличие антител к возбудителю патологии, а иммуноблот (вестерн-блот) делает то же, но с более высокой точностью. Диагностический метод также позволяет установить идентичность антител, направленных против определенных компонентов вируса гепатита.

Особенности анализа

Гепатит С провоцирует РНК-содержащий вирус, способный передаваться через биологические жидкости организма. В составе возбудителя имеются белки, к которым наш иммунитет вырабатывает антитела. Их и обнаруживают в сыворотке крови зараженного гепатитом.

Первыми (через несколько недель) образуются белковые соединения класса IgM. Примерно через полтора месяца активизируется производство иммуноглобулинов класса IgG, максимальная концентрация которых наблюдается спустя полгода. Поэтому анализы целесообразно делать через 3-6 недель после вероятного заражения.

Для обнаружения антител используют недорогой иммуноферментный тест (ИФА). Это первичное исследование не всегда позволяет поставить точный диагноз. Поэтому дальше применяется специфическая технология – метод иммуноблота. Поводом для назначения дополнительного тестирования являются положительные или сомнительные результаты иммуноферментного анализа.

Иммуноблоттинг гепатита рекомендуется проводить, когда в крови появляются антитела. Тест дает возможность обнаружить широкий спектр специфических белков, продуцируемых защитной системой в ответ на проникновение патогена. Срок исполнения – до 5 рабочих дней.

Кому и когда назначают

Основные показания к назначению иммуноблота:

Как и ИФА, исследование информативно после появления в крови специфических антител, то есть через 3-4 недели от момента проникновения возбудителя. Именно в этот период белковые соединения можно обнаружить с помощью иммуноблота.

Когда анализ вестерн-блот может быть неточным:

Подтверждением наличия возбудителя в таких случаях являются положительные данные, полученные при повторных исследованиях крови на наличие вирусной РНК. Анализ проводится методом полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Как подготовиться

Специальная подготовка к сдаче анализа на гепатит не нужна. Достаточно придерживаться стандартных условий – сдавать кровь натощак или не раньше, чем через четыре часа после еды (необильной и нежирной).

Перед проведением исследования на гепатит не рекомендуется употреблять чай, кофе, соки и другие сладкие напитки. Разрешается питье простой воды.

Расшифровка результатов

Анализы трактуются в зависимости от комбинации антигенов, к которым выявлены антитела.

Если обнаружены антитела:

При положительном ИФА и отрицательном иммуноблоте считают, что результат иммуноферментного теста был ложноположительным, а в дальнейшем обследовании нет необходимости – человек здоров, гепатит отсутствует.

Сомнительный или положительный иммуноблот – повод сдать кровь на определение РНК вируса методом полимеразной цепной реакции. На основании этого анализа выдается общее заключение. Если результат ПЦР отрицательный при положительном иммуноблоте, исследование рекомендуется повторить через несколько месяцев.

Иногда получают значения, попадающие в промежуток с названием «серая зона». Это значит, что гепатит под сомнением, и требует повторения теста через две недели. При получении тех же показателей результат анализа считается отрицательным.

Источник

Вирусные гепатиты

Вирусный гепатит А

Гепатит А (ГА, hepatitis A) — острая энтеровирусная инфекция. Возбудитель — вирус гепатита А (ВГА, HAV) — энтеровирус типа 72. Геном вируса представлен однонитчатой РНК. Вирус гепатита А содержит единственный антиген (HA-Ag). Удельный вес гепатита А в суммарной заболеваемости вирусными гепатитами составляет 70–80 %. В структуре заболеваемости гепатитом А дети составляют до 80%, причем основная масса — дошкольники и школьники начальных классов.

Антитела IgM к вирусу гепатита А

Антитела IgM к вирусу гепатита А в сыворотке в норме отсутствуют. Достоверное подтверждение диагноза ГА достигается серологическими методами — обнаружением нарастания уровня специфических антител (анти-HAV), принадлежащих к иммуноглобулинам класса М (анти-HAV IgM). При гепатите А нарастание уровня антител, относящихся к IgM, начинается еще в инкубационном периоде, за 5–10 дней до появления первых симптомов болезни, и быстро прогрессирует. К моменту первичного обращения больного к врачу, уровень анти-HAV IgM успевает достичь высоких показателей, чтобы быть выявленным методом ИФА. Общепринято, что анти-HAV IgM у больных обнаруживаются в начале клинических проявлений заболевания и сохраняются до 6 мес после перенесенной инфекции.

Определение анти-HAV IgM

В настоящее время выделяют следующие формы вирусных гепатитов: гепатит А, гепатит В, гепатит С, гепатит D и гепатит Е. Для диагностики каждой из перечисленных форм вирусных гепатитов используют определенный перечень маркеров.

Определение анти-HAV IgG

Основной тест специфической диагностики гепатита А. Нарастание анти-HAV IgG происходит в более поздние сроки — в фазу реконвалесценции — и поэтому не может служить критерием ранней диагностики гепатита А. Выявление анти-HAV IgG у здоровых людей (возможно у 30–60% здорового населения) свидетельствует о предыдущей инфекции и иммунитете (ретроспективная диагностика).

Антиген гепатита А — HA-Ag

Появляется в сыворотке крови в конце преджелтушного периода. У большинства больных сохраняется в сыворотке крови на протяжение 1–2 недель заболевания. Из-за кратковременности пребывания в сыворотке крови больного для диагностических целей не используется.

Вирусный гепатит В

Гепатит В — вирусная антропонозная инфекция. Возбудитель — вирус гепатита В (ВГВ, HBV) — относится к семейству гепаднавирусов, ДНК-содержащих вирусов, поражающих клетки печени. Вирионы ВГВ имеют наружную липопротеидную оболочку и нуклеокапсид, содержащий двунитчатую циркулярную ДНК и ДНК-зависимую ДНК-полимеразу.

Поверхностный антиген (HBsAg) гепатита В в сыворотке

Поверхностный антиген гепатита В в сыворотке в норме отсутствует. Обнаружение поверхностного антигена (HBsAg) гепатита В в сыворотке подтверждает острое или хроническое инфицирование вирусом гепатита В (HBV).

При остром заболевании HBsAg выявляется в сыворотке крови в последние 1–2 недели инкубационного периода и в первые 2–3 недели клинического периода. Циркуляция HBsAg в крови может ограничиваться несколькими днями, поэтому следует стремиться к раннему первичному обследованию больных. Частота выявления HBsAg зависит от чувствительности используемого метода исследования. Метод ИФА позволяет выявить HBsAg более чем у 90% больных. Почти у 5% больных самые чувствительные методы исследования не обнаруживают HBsAg, в таких случаях этиология вирусного гепатита В подтверждается наличием анти-HBcAg IgM. Концентрация HBsAg в сыворотке крови при всех формах тяжести гепатита В в разгар заболевания имеет значительный диапазон колебаний, вместе с тем имеется определенная закономерность: в остром периоде существует обратная связь между концентрацией HBsAg в сыворотке и тяжестью болезни.

Высокая концентрация HBsAg чаще наблюдается при легких и средне-тяжелых формах болезни. При тяжелых и злокачественных формах, концентрация HBsAg в крови чаще низкая, причем у 20% больных с тяжелой формой и 30% со злокачественной антиген в крови может вообще не обнаруживаться. Появление на этом фоне у больных антител к HBsAg расценивается как неблагоприятный прогностический признак; он определяется при злокачественных формах (фульминантных) гепатита В.

При остром течении гепатита В, концентрация HBsAg в крови постепенно снижается, вплоть до полного исчезновения этого антигена. HBsAg исчезает у большинства больных в течение 3 мес от начала острой инфекции. Снижение концентрации HBsAg более чем на 50 % к концу 3-й недели острого периода, как правило, свидетельствует о близком завершении инфекционного процесса. Обычно у больных с высокой концентрацией HBsAg в разгар болезни он обнаруживается в крови в течение нескольких месяцев. У больных с низкой концентрацией HBsAg исчезает значительно раньше (иногда через несколько дней после начала заболевания). В целом, срок обнаружения HBsAg колеблется от нескольких дней до 4–5 мес. Максимальный срок обнаружения HBsAg при гладком течении острого гепатита В не превышает 6 мес от начала заболевания.

HBsAg может быть выявлен у практически здоровых людей, как правило, при профилактических или случайных исследованиях. В таких случаях исследуют другие маркеры вирусного гепатита В — анти-HBcAg IgM, анти-НВс IgG, анти-HBeAg и изучают функцию печени. При отрицательных результатах необходимы повторные исследования на HBsAg. Если повторные исследования крови в течение более 3 месяцев выявляют HBsAg, такого человека относят к хроническим носителям поверхностного антигена. Носительство HBsAg — довольно распространенное явление. В мире насчитывается более 300 млн носителей; у нас в стране — около 10 млн.

Исследование крови на наличие HBsAg применяют в следующих целях:

Антитела к поверхностному антигену гепатита В

Анти-HBsAg обнаруживаются в конце острого периода вирусного гепатита В или, чаще всего, через 3 мес от начала инфекции, изредка позже (до года) и сохраняются долго, в среднем 5 лет (Хазанов А.И., 1981). Анти-HBsAg обнаруживаются не сразу после исчезновения HBsAg. Продолжительность фазы «окна» варьирует от нескольких недель до нескольких месяцев. Антитела к поверхностному антигену гепатита В нейтрализуют вирус и рассматриваются как признак иммунитета. Они относятся к классу IgG.

Определение анти-HBsAg имеет важное значение для оценки течения гепатита В и его исходов, так как характеризует иммунный ответ конкретного больного. Это надежный критерий развития постинфекционного иммунитета и выздоровления. Выявление анти-HBsAg может служить критерием ретроспективной диагностики гепатита ранее не уточненной этиологии.

Анти-HBsAg свидетельствуют о ранее перенесенной инфекции. Выявление антител к HBsAg играет важную роль в определении контингента для вакцинации против гепатита В. Согласно рекомендациям ВОЗ, если уровень анти-HBsAg составляет менее 10 мМЕ/л, таким лицам показана вакцинация против гепатита В, при уровне 10–100 мМЕ/л вакцинация должна быть отложена на один год, при уровне более 100 мМЕ/л вакцинация показана через 5–7 лет.

Общие антитела к ядерному антигену гепатита В состоят из иммуноглобулинов класса М и G. Определение общих антител к ядерному антигену гепатита В может использоваться только для ретроспективной диагностики гепатита В, так как у 5–10 % больных исследования на HBsAg дают отрицательный результат. Для того чтобы установить, в какой стадии развития находится гепатит В, необходимо дополнительное определение антител IgM. Антитела класса IgM — маркер активной репликации вируса, т.е. острой инфекции, а антитела класса IgG — перенесенной инфекции.

Антитела IgM к ядерному антигену гепатита В (анти-HBcAg IgM) в сыворотке

Анти-HBcAg IgM в сыворотке в норме отсутствуют. Анти-HBcAg IgM обнаруживаются уже в начале острой фазы болезни, еще до появления или в первые дни желтухи, иногда даже в конце инкубации. Выявление анти-HBcAg IgM расценивают как убедительный критерий диагностики гепатита В, особенно при отрицательных результатах исследования на HBsAg. Анти-HBcAg IgM циркулируют в крови больных в течение нескольких месяцев (2–5 месяца) до периода реконвалесценции, а затем исчезают, что рассматривается как признак очищения организма от вируса гепатита В.

Установлено, что высокие концентрации HBeAg соответствуют высокой ДНК-полимеразной активности и характеризуют активную репликацию вируса. Наличие HBeAg в крови свидетельствует о высокой ее инфекциозности, т.е. присутствии в организме обследуемого активной инфекции гепатита В и обнаруживается только в случае присутствия в крови HBs-антигена. У больных хроническим активным гепатитом противовирусные препараты применяют только при обнаружении в крови HBeAg.

Наличие НВе-антигена свидетельствует о продолжающейся репликации вируса и инфекциозности больного. HBeAg-антиген — маркер острой фазы и репликации вируса гепатита В.

Анти-HBeAg в сыворотке в норме отсутствуют. Появление АHTH-HBeAg-антител указывает обычно на интенсивное выведение из организма вируса гепатита В и незначительное инфицирование больного. Эти антитела появляются в острый период и сохраняются до 5 лет после перенесенной инфекции. При хроническом персистирующем гепатите, анти-HBeAg обнаруживаются в крови больного вместе с HBsAg. Сероконверсия, т.е. переход HBeAg в анти-HBeAg при хроническом активном гепатите, чаще прогностически благоприятна, но такая же сероконверсия при выраженной цирротической трансформации печени прогноза не улучшает.

Гепатит С (ГС, hepatitis С) — вирусное заболевание, наиболее часто протекающее в виде посттрансфузионного гепатита с преобладанием безжелтушных и легких форм и склонное к хронизации процесса. Возбудитель — вирус гепатита С (ВГС) — имеет сходство с флавови-русами, содержит РНК.

Примерно 90% всех случаев посттрансфузионных гепатитов связаны с ВГС. Среди доноров антитела к вирусу гепатита С (анти-ВГС) обнаруживают в 0,2–5% случаев. У 40–75% пациентов регистрируется бессимптомная форма болезни, у 50–75% больных острым ВГС формируется хронический гепатит, у 20% из них развивается цирроз печени. Важная роль ВГС отводится и в этиологии гепатоклеточной карциномы.

Антитела к вирусу гепатита С в сыворотке

Антитела к вирусу гепатита С в сыворотке в норме отсутствуют. Диагностика гепатита С основана на обнаружении суммарных антител к ВГС методом ИФА, которые появляются в первые 2 нед заболевания и свидетельствуют о возможной инфицированности вирусом или перенесенной инфекции. Анти-ВГС-антитела могут сохраняться в крови реконвалесцентов на протяжении 8–10 лет с постепенным снижением их концентрации. Возможно позднее обнаружение антител спустя год и более после инфицирования.

При хроническом гепатите С, антитела определяются постоянно и в более высоких титрах. Существующие в настоящее время тест-системы для диагностики ВГС основаны на определении антител класса IgG, поэтому разрабатываются тест-системы нового поколения, которые позволят верифицировать активную инфекцию (определять антитела класса IgM). Антитела класса IgM могут выявляться не только при остром ВГС, но и при хроническом гепатите С. Снижение их уровня в процессе лечения больных хроническим гепатитом С может свидетельствовать об эффективности лекарственной терапии. Обнаружение антител к ВГС методом ИФА требует подтверждения способом иммуноблотинга для исключения ложно-положительного результата исследования.

Определение антител к вирусу гепатита С используют для диагностики острого и хронического гепатита С, персистирующего хронического гепатита. Вирус гепатита С может быть причиной развития цирроза и рака печени, поэтому данное исследование показано при этих заболеваниях.

Иммуноблотинг на антитела к белкам вируса гепатита С в сыворотке

Антитела к вирусу гепатита С в норме отсутствуют. Метод иммуноферментного анализа, применяемый для определения антител к ВГС, является скрининговым. В случае получения положительного результата для подтверждения его специфичности используют метод иммуноблотинга Western-blot — встречную преципитацию в геле антител в сыворотке крови больного с различными вирусными белками, подвергнутыми разделению по молекулярной массе с помощью электрофореза и нанесенными на нитроцеллюлозу. Исследование считается положительным, если выявляются антитела к белкам интенсивностью +1 к 2 или более антителам ВГС. Специфичными для ВГС являются антитела к белкам — Core, NS3-1, NS3-2, NS1, NS5.

Иммуноблотинг на вирус гепатита С служит подтверждающим тестом специфичности метода ИФА.

Вирусный гепатит D

Гепатит D — вирусная инфекция, протекающая вследствие биологических особенностей вируса исключительно в виде ко-или суперинфекции при гепатите В, характеризующаяся тяжелым течением часто с неблагоприятным исходом.

Возбудитель — вирус гепатита D (BГD) — по своим биологическим свойствам приближается к вироидам — обнаженным молекулам нуклеиновых кислот. Печень человека — единственное место репликации BГD. Известно существование двух вариантов инфекции: коинфекция (одновременное заражение ВГВ и BГD) и суперинфекция (заражение HBsAg-позитивных пациентов). Сочетание ВГВ и BГD сопровождается развитием более тяжелых форм патологического процесса, что определяется главным образом действием BГD. Летальность при суперинфекции достигает 5–20 %. Инфицирование дельта-вирусом может вызывать острое заболевание, заканчивающееся выздоровлением, или формировать хроническое носительство BГD.

При гепатите D могут отсутствовать в крови маркеры гепатита В — анти-НВс и HBs-антиген — и наблюдается угнетение ДНК-полимеразной активности, так как BГD ингибирует репликацию вируса гепатита В.

Антитела lgM к вирусу гепатита D в сыворотке

Антитела IgM к вирусу гепатита D в сыворотке в норме отсутствуют. Антитела BГD IgM (анти-BГD IgM) появляются в острый период «дельта-инфекции». По мере выздоровления при BГD происходит элиминация вируса из печени и исчезновение анти-BГD IgM. При хронизации процесса наблюдается персистирование BГD в ткани печени и анти-BГD IgM в высокой концентрации в крови. Антитела BГD IgM говорят об активной репликации вируса.

Антитела IgG к вирусу гепатита D в сыворотке

Антитела IgG к вирусу гепатита D в сыворотке в норме отсутствуют. Антитела BГD IgG (анти-BГD IgG) появляются в период реконвалесценции, и их концентрация постепенно снижается в течение нескольких месяцев. Определение антител BГD IgG может служить критерием ретроспективной диагностики гепатита ранее не уточненной этиологии.

Возбудителем вирусного гепатита Е (ВГЕ) является РНК-вирус. Для заболевания характерен фекально-оральный путь передачи, преимущественно водный. Инкубационный период болезни — около 35 сут. Клиническое течение острого ВГЕ сходно с ВГА. Существенно тяжелее заболевание протекает у беременных, особенно в III триместре.

Для специфической диагностики ВГЕ используются методы ИФА, основанные на выявлении антител класса IgM. Обнаружение в крови повышенного уровня анти-ВГЕ IgM служит лабораторным подтверждением диагноза.

ПЕРИОДЫ ОБНАРУЖЕНИЯ В КРОВИ МАРКЕРОВ ВИРУСНОГО ГЕПАТИТА В ПРИ ОСТРОМ ПРОЦЕССЕ:

1) поверхностный HBs-антиген — с инкубационного периода до периода ранней реконвалесценции (5,5–6 мес);

2) антиген НЬе обнаруживается в инкубационный и продромальный периоды (до 3,5 мес); его выявление свидетельствует о репликации вируса;

3) антитела к Hbe-антигену появляются в острый период заболевания (3–4-й месяц) и сохраняются до нескольких лет;

4) антитела класса IgM к ядерному антигену (анти-HBc-IgM) обнаруживаются в продромальном периоде и сохраняются до периода реконвалесценции (со 2-го по 6-й месяц заболевания);

5) антитела класса IgG к ядерному антигену (анти-HBc-IgG) возникают в продромальном периоде и сохраняются на протяжении всей жизни (ведущий маркер вирусного гепатита В);

6) антитела к поверхностному Hbs-антигену (анти-HBs) появляются в стадии поздней реконвалесценции (6-й месяц) и сохраняются до 5 лет.

Источник

Лечение заболеваний внутренних органов
Adblock
detector